¿Qué es un PCR (Reacción en cadena de la polimerasa)?
Es una técnica de
laboratorio que permite amplificar pequeños fragmentos de ADN. Se utiliza de
forma rutinaria en la clonación de ADN, el diagnóstico médico y el análisis
forense de ADN.
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Criterio
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Características
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(T)
Tema:
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Diagnóstico de lupus eritematoso
sistémico (LES) o nefropatía lúpica (NL) por medio de factores genéticos que
influyen en la susceptibilidad a padecer esta enfermedad.
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(O)
Objetivos:
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Establecer la existencia de la asociación genética
entre el polimorfismo NA1 y NA2 del receptor FcyRIIIB con la susceptibilidad
a LES y nefropatía lúpica.
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(M)
Tipo de muestra biologica:
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5ml de sangre venosa en tubos
Vaccutainer anticoagulados con EDTA.
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(G)
Gen o secuencia a amplificar:
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Tipificación genética del receptor FcyRIIIB para los
alelos:
NA1 118
pb
NA2 171 pb
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NA1 Sentido
5’ CTC AAT GGT ACA GGG TGC TC 3’
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NA1 Anti sentido
5’ GGC CTG GCT TGA GAT GAG GT 3’
·
NA2 Sentido
5’ CTC AAT GGT ACGGCG TGC TT 3’
·
NA2 Anti sentido
5’ CAC CTG TAC TCT CCA CTG TCG TT 3’.
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(AN)
Tipo de áacido nucleico a ser extraído:
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ADN genómico del paciente.
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(Ex)
Extraccion:
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Uso del kit comercial Wizard Genomic DNA
purification (Promega, USA)
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(PCR)
Tipo:
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PCR sensible en un termociclador
PX2 (Thermo electron coorporation, USA):
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En 30 ciclos consistentes
Ø D:
94°C 1 min
Ø M:
63°C 1 min
Ø E:72°C
1 min.
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Una extensión final a 72°C por 10
min.
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(V)
Visualizacion:
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Electroforesis en gel de agarosa al 2.5% observados
en transiluminador a una longitud de onda de 254 nm.
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Conclusión: Individuos que
portan el genotipo NA1/NA2 o que portan el alelo NA2 tienen más probabilidad de
desarrollar LES y cuando el paciente lúpico porta el genotipo NA1/ NA1 tienen
mayor probabilidad de desencadenar nefropatía lúpica.
Referencia Bibliográfica:
